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仪器分析总结报告

时间:2024-05-14 01:16:40 点击次数:

  买球官网: 简要介绍原子吸收分光光度计相关知识,并记录原子吸收分光光度计的发展。

  随着科学技术的发展,特别是材料科学、生命科学、空间技术的大发展,对不透明物质中金属元素的分析越来越多,所以原子吸收分光光度计(AAS)仪器的应用越来越广泛;许多食品、药品、自然环境中的微量重金属元素能引起致癌,对人类生活、生存、发展的威胁越来越大;而这些微量重金属元素的分析,目前也是主要依靠AAS。因此,AAS仪器及应用的发展非常迅猛,值得广大科技工作者重视。

  光源一般采用空心阴极灯、无极放电灯,作为光源要求发射的待测元素的锐线光谱有足够的强度、背景小、稳定性好常见的原子化器有火焰原子化器和石墨炉原子化器火焰原子化器由喷雾器、预混合室、燃烧器 3 部分组成其特点是操作简便、测量重复性好石墨炉原子化器是一类将试样放置在石墨管壁、石墨平台、碳棒盛样小孔或石墨坩埚内用电加热至高温实现原子化的系统,其中管式石墨炉是最常用的原子化器。 原子化程序分为干燥、灰化、原子化、高温净化 4 个步骤。特点为原子化效率高,在可调的高温下试样利用率达 100%;灵敏度高,其检测限达10-6~10-14;试样用量少,适合难熔元素的测定分光系统(单色器)由凹面反射镜,狭缝或色散元件组成。色散元件为棱镜或衍射光栅检测系统由检测器(光电倍增管)放大器,对数转换器和电脑组成。

  第1代:单火焰原子吸收分光光度计,如日立的 Z500北京东西分析仪器有限公司早期的单火焰型等

  第2代:火焰原子吸收分光光度计 + 外置石墨炉,如普析的TAS990等 其设计目的是为了弥补火焰吸收光谱仪灵敏度不够的缺陷

  第3代:一体化的火焰 + 内置石墨炉原子吸收分光光度计,这也当今的主流产品,如岛津公司的 AA6800 PE 公司的AA800 北京东西分析仪器有限公司AA7000系列等。

  常规的AAS大多采用能够发射元素分析谱线的空心阴极灯做光源,因此称为线光源AAS。但是,线光源AAS不能对多个元素同时进行分析检测,并且,因为无法提供分析谱线的轮廓信息以及其侧翼的光谱背景信息,同时背景都较大,因此,线光源AAS必须配置专门的背景校正器。这些缺陷都限制了原子吸收光谱的应用范围。近几年来,随着高光谱分辨能力的中阶梯光栅光谱仪技术和具有多通道检测能力的半导体图像传感器技术的日趋成熟,使用连续光源做原子吸收分光光度计(CS-AAS)的光源已经成为可能;并且它有可能成为未来AAS仪器的发展方向。 德国Jena公司最近刚推出的CS-AAS(ContrAA) ,是对AAS的重大突破、是AAS的最新进展之一;常规的传统线光源原子吸收分光光度计(LS-AAS) ,一个灯只能作一个元素。而CS-AAS,采用交叉色散系统和CMOS图像传感器的形式,不需要移动光路中的任何部件,可以同时检测从As193.76nm到Cs852.11nm之间的多条任意分析谱线,具有同时多元素定性、定量分析能力;检出限和精密度达到或超过线光源AAS的水平,从而使AAS仪器发展到一个新的水平。德国耶拿公司的ContrAA连续光源原子。吸收分光光度计(CS-AAS)对部分元素检出限与锐线光源原子吸收分光光度计(LS-AAS)检出限的比对见

  ContrAA 采用高聚焦短弧氙灯作为连续光源,该高聚焦短弧氙灯是一个气体放电光源,灯内充有高压氙气,在高频高压电压的激发下形成弧光放电,辐射出从紫外到近红外的强连续光谱。能量比一般氙灯大许多,电极距离<1mm,发光点只有200μm,发光点温度10000KT。 这样的设计,使仪器提供的光谱信息非常丰富,改善了分析结果准确性和测量精度。其在启动后即能很快达到接近最大光输出,这是该原子吸收光谱仪不需要通过灯预热来防止产生漂移的主要原因。多元素顺序测定时,可测量元素周期表中60余个金属元素,并可以测量放射性元素,为研究原子光谱的机理提供了分析手段。 过去,连续光源一直难以在原子吸收光谱仪上得到应用,主要原因在于连续光源须在每一个分析波长处与空心阴极灯有同样的光辐射强度和稳定性, 这一技术对于仪器的分光系统和检测系统有着极高的要求。原子吸收谱线Xnm,耶拿公司的ContrAA采用了石英棱镜高分辨率的大面积中阶梯光栅组成双单色器解决了0.003nm带宽的问题,使连续光源在近似单色光的条件下测量原子吸收。 连续光源AAS的主要突破点是:

  ①、采用300W高聚焦短弧氙灯作连续光源,波长覆盖了原子吸收全部波长范围。分析结果准确、测量精度高。

  ③、 成功的解决了高灵敏度CCD检测器的应用技术难关, 与中阶梯光栅结合, 使分辨率达到0.002nm。

  世界上第一台成熟的横向加热石墨炉AAS商品仪器,是美国的PE公司于1990年推出的。目前日趋成熟。世界上已有5家公司(PE、Jena、Aurora、普析通用、GBC)能生产横向加热石墨炉AAS。横向加热石墨炉具有纵向加热石墨炉无可比拟的八大优点;

  一束光通过火焰,一束光不通过火焰,直接经单色器此类仪器可消除光源强度变化及检测器灵敏度变动影响。

  使用两种或多种空心阴极灯,使光辐射同时通过原子蒸气而被吸收,然后再分别引到不同分光和检测系统,测定各元素的吸光度值。此类仪器准确度高,可采用内标法,并可同时测定两种以上元素。但装置复杂,仪器价格昂贵。

  我们组讨论通用或最新原子吸收分光光度计的功能和性能比较,原子分光光度计的结构、原子分光光度计的发展阶段、连续光源的AAS仪器、石墨炉横向加热技术的攻关成果、原子分光光度计的单色器等方面进行阐述。

  2. 中国科学院上海生物工程研究中心 上海 200233 第 1 期~第 3 期

  组员搜集资料丰富、完整;对资料的归纳能力、观点的表达、论述能力强;团结协作精神好,能主动与其他成员一起工作完成总结报告和PPT的制作,80-100分;

  组员搜集资料比较完整;对资料的归纳能力、观点的表达、论述能力一般;团结协作精神一般,在组长要求下能与其他成员一起工作完成总结报告和PPT的制作, 60-79分;

  组员搜集资料不十分完整;对资料的归纳能力、观点的表达、论述能力较差;团结协作精神较差,没有主动与其他成员一起工作完成总结报告和PPT的制作,0-59分。

  电位法一般使用专用的指示电极,把被测离子的活(浓)度通过毫伏电位计显示为电位读数,再有能斯特方程计算求其活度;电位滴定法类似于化学滴定法,是利用电极电位在化学计量点附近的突变来代替指示剂的颜色变化来确定滴定终点。被测物质含量的求取和化学滴定法完全相同

  第一类电极:金属电极与其金属离子溶液组成的体系,其电极电位决定于该金属离子的活度

  第三类电极:金属与两种具有共同银离子的难溶盐或难解离的络离子组成的电极体系

  使用条件:1、盐桥中电解质不含有被测离子;2、电解质的正负离子的迁移率应该基本相等;3、要保持盐桥内离子浓度尽可能的大,以保证减小液接电位

  5、 生物电极:一种将生物化学和电化学原理结合而制成的电极(分为酶电极、离子敏感场效应晶体管、组织电极)

  响应时间:从离子选择电极与参比电极一起与试液接触时算起,直至电池电动势达到稳定值时为止,在此期间所经过的时间为实际响应时间

  滴定终点的确定:滴定反应发生时,在化学计量点附近,由于被滴定物质的浓度发生突变,指示电极的电位随之产生突越,由此确定滴定终点

  2、 氧化还原反应在滴定过程中,溶液中氧化态和还原态的浓度比值发生变化,可采用零类电极作指示电极,一般都用铂电极

  4、 络合反应用EDTA进行电位滴定时,可采用两种类型的指示电极;一是应用于个别反应的指示电极;另一种能够指示多种金属离子的电极,谓之pM电极

  极谱极大:在电流—电位曲线上出现的比扩散电流要大得多的突发电流峰:通常采用加入表面活性剂来抑制

  氧电流:通入惰性气体,或在中性或碱性溶液中加入亚硫酸钠,强酸中加入碳酸钠或铁粉,从而消除氧的电流干扰

  2、 在阴极射线示波器记录电流—电位曲线、 在一滴汞生长周期内完成一个极谱波的测定

  先将被测物质以某种方式富集在电极表面,而后借助线性电位扫描或脉冲技术将电极表面富集物质溶出根据溶出过程得到的电流—电位曲线来进行分析的方法(阳极溶出伏安法、阴极溶出伏安法、吸附溶出伏安法、)

  指工频下交流电压均方根值升高,超过额定值的10%,并且持续时间大于1分钟的长时间电压变动现象

  :1、电极材料和电极表面状态;2、析出物质的形态;3、电流密度;4、温度

  :指恒电流电解法,在恒定的电流条件下进行电解,然后直接称量电极上析出物质的质量来进行分析,主要用于精铜产品的鉴定和仲裁分析2、

  :控制阴极或者阳极电位为一恒定值条件下进行电解的方法,特点是选择性高,可用于分离并测定银(与铜分离)、铜(与铋、铅、银、镍等分离)、铋(与铅、锡、镝等分离)、镉(与锌分离)等

  具有准确、灵敏、选择性高,特别适用于混合物质的测定,同样也是研究电极过程、反应机理等方面的有效方法

  酶传感器(以氧作为待女子受体的酶传感器、接替型酶传感器、直接电子传递型酶传感器)

  :1、电极表面的液相传质速率加快,提高测量响应速度;2、通过电流的电流很小,在高阻抗体系的伏安法测量中可以不考虑欧姆电位降的补偿;3、提高灵敏度、4、可以用于生物活体及单细胞分析

  :1、容易达到稳定电流;2、微电极的时间常数很小;3、适用于高阻抗溶液体系

  基于物质发射的电磁辐射或物质与辐射相互作用后产生的辐射或发生信号变化来测定物质的性质、含量和结构的一类仪器分析方法。分为光谱法和非光谱法,包括三个过程:1.能源提供能量;2.能量与物质作用;3.产生被检测信号。

  由电磁辐射提供能量致使量子从低能级向高能级的跃迁过程(按电磁辐射作用对象分为:原子吸收、分子吸收、磁场诱导吸收)

  :由高能级向低能级跃迁并发射电磁波的过程(按受作用的对象分为:原子发射、分子发射)

  由低能级吸收电磁辐射向高能级跃迁,再由高能级跃迁回低能级并发射相同频率的电磁辐射,同时存在弛豫现象的过程。

  (吸收光谱、发射光谱、散射光谱):1、基于原子、分子外层电子能级跃迁的光谱法:原子吸收光谱法、原子发射光谱法、原子荧光光谱法、紫外—可见光吸收光谱法、分子荧光和分子磷光光谱法、化学发光分析法

  2、基于原子内层电子能级跃迁发光谱法:X射线分析法—X射线荧光法、X射线吸收法、X射线、基于原子核能级跃迁的光谱法:核磁共振波谱法

  检测系统:理想的检测器、光电检测器(硒光电池、真空管电管、光导电检测器、硅二极管、光电倍增器、硅二极管阵列、电荷转移器件、)、热检测器(真空热电偶、测热辐射计、热释电检测器)

  原子能级:原子有原子核和核外电子组成,核外电子按照一定规律排列在一定轨道绕核运动,由于不同轨道的能级不同,所以每个电子的能量也由它所处的能级所决定的,意即不同能量的电子发生跃迁时所需的激发能是不一样的。不同能级间的能量差不同且量子化;原子的吸收光谱由原子最外层电子的跃迁所产生的。

  原子化过程:被测元素由试样转入气相,并转化为基态原子的过程。包括火焰原子化法(常用为乙炔-空气火焰)和非火焰原子化法(最常用的是管式石墨炉原子化器)两种方法。

  。共振线是原子发射光谱中最强的谱线。处于较低能级的激发态(第一激发态)直接跃迁到基态时所辐射的谱线称为第一共振线(不同元素的特征谱线)。用来进行光谱分析的谱线叫做分析线,分析线常常选用灵敏线或最后线。灵敏线:是各元素中最容易激发或激发电位较低,跃迁几率较大的谱线。灵敏线大多是一些共振线。

  定性分析:各种元素都有自己的特征谱线组→识别各元素的特征谱线→鉴定元素的存在。

  原子发射光谱法定义:原子发射光谱分析(AES)是根据原子所发射的光谱来测定物质的化学组成的分析方法。

  光谱定性分析可靠、灵敏、快速、 简便、应用范围广。周期表上约七十个元素可以用光谱方法较容易地定性鉴 定,这是光谱分折的突出应用。●在多数情况下,分析前不必把待分析的元素从基体元素中分离出来。

  由光源提供能量使试样蒸发,形成气态原子,并进一步使原子激发产生光辐射→将光源发出的复合光排列成谱线,形成光谱→用检测器检测谱线的强度和波长

  自吸现象:原子在高温时被激发,发射某一波长的谱线,而处于低温状态的同类原子又能吸收这一波长的辐射的现象

  使电极之间的气体电离的方法:紫外线照射、电子轰击、电子或离子对中性原子碰撞以及金属灼热时发射电子等

  自持放电:在电极间的气体被击穿后,即使没有外界电离作用,仍然继续保持电离,使放电持续的现象

  1、检出限低;2、稳定性好、精密度高、准确度高;3、自吸效应、基体效应小;4、选择合适的观测高度,光谱背景小;

  1、 溶液试样:一般采用气动雾化(同心型、直角型、特殊型)、超生雾化和电热蒸发方式2、 气体试样:直接引入

  3、 固体试样:1、试样直接插入进样;2、电弧和火花熔融法;3、电热蒸发进样;4、激光熔法

  定义:AAS是基于物质产生的原子蒸气对特定的谱线(通常是待测元素的特征谱线)的吸收作用来进行定量分析的一种方法。

  原子吸收光谱谱线变宽的因素:自然宽度、Doppler变宽(热变宽)、碰撞变宽(Lorentz洛伦兹变宽、Holtsmark霍尔茨马克变宽)、场致变宽、自吸变宽

  原子吸收光谱法特点:选择性好、灵敏度高、精密度高、操作方便和快捷、应用范围广

  缺点:光源单一,不适宜用于多元素混合物的定性分析,对于高熔点、形成氧化物、形成复合物或形成碳化物后难以原子化元素的分析灵敏度极低。

  1.原子吸收法的选择性高,干扰较少且易于克服。由于原于的吸收线比发射线的数目少得多,这样谱线重叠的几率小得多。而且空心阴极灯一般并不发射那些邻近波长的辐射线经,因此其它辐射线.原子吸收具有较高的灵敏度。

  在原子吸收法的实验条件下,原子蒸气中基态原于数比激发态原子数多得多,所以测定的是大部分原子。

  ☆能发射待测元素的共振线、比吸收光谱线更窄的锐线光谱,光的强度稳定且背景小。空极阴极灯的发光强度与工作电流有关。使用灯电流过小,放电不稳定;灯电流过大,溅射作用增强,原子蒸气密度增大,谱线变宽,甚至引起自吸,导致测定灵敏度降低,灯寿命缩短。因此在实际工作中应选择合适的工作电流。

  为了获得稳定的发射强度,在使用前要进行预热,根据不同元素灯的性质预热时间也不同,一般在5~10分钟。

  原子吸收光谱法常用的原子化系统:火焰原子化系统,石墨炉子原子化系统和低温原子化系统(1) 火焰原子化系统

  结构:雾化器、预混合室、燃烧器及其高度控制、燃气与助燃气气路控制系统特点:适用范围广,分析操作简单,分析速度快、分析成本低

  缺点:同轴雾化器雾化效率低,所需试样溶液体积较大、火焰原子化效率低伴随复杂的火焰反应、原子蒸气在光程中滞留时间短,燃气和助燃气体稀释作用限制了方法检出限的降低,而且只能分析液体试样

  石墨炉原子化法(电热原子化法)特点:采用直接进样和程序升温方式可达3500℃,升温速度快,绝对灵敏度高,可分析元素种类多,所用试样少,

  1、配置与待测试样溶液基体相一只的标准溶液;2、当配置与待测试样溶液基体相一致的标准溶液有困难时,采用标准加入法;

  :1、改变火焰类型;2、改变火焰特性;3、加入释放剂;4、加入保护剂;5、加入缓冲剂;6、采用标准加入法

  由于电离能较低的碱金属和见图金属元素在原子化过程中产生电离而使基态原子数减少,导致吸光度下降;

  减少的方法:加入电离能较低的消电离剂、利用强还原性富燃火焰、采用标准加入法、提高金属元素的总浓度

  当光谱通带内存在其他谱线,分子吸收和光散射也属于光谱干扰减少吸收线重叠干扰方法:选用较小的光谱通带;选用被测元素的其他分析线;预先分离干扰元素

  以波长λ为横坐标,吸光度A为纵坐标作图所得曲线。光吸收具有选择性和加和性。红外吸收光谱法

  ,当样品受到频率连续变化的红外光照射时,分子吸收某些频率的辐射,并由其振动运动或转动运动引起偶极矩的净变化,产生的分子振动和转动能级从基态到激发态的跃迁,从而形成的分子吸收光谱。一般指有机物质在

  -1红外线的照射下,选择性的吸收其中某些频率后,用红外光谱仪记录所形成的吸收谱带。特点:

  1)红外吸收只有振-转跃迁,能量低;2)应用范围广;3)分子结构更为精细的表征;4)固、液、气态样均可用,且用量少、不破坏样品;6)分析速度快;7)与色谱等联用具有强大的定性功能。

  又称弯曲振动或变角振动,基团键角发生周期变化而键长不变的振动。分为面内变形振动和面外变形振动。产生吸收峰的条件:只有偶极矩大小或方向有一定改变的振动才能吸收红外光而发生振动能级跃迁。线种振动方式,非线种。

  产生红外光谱的两个条件:1.辐射应具有能满足物质产生振动跃迁所需的能量;

  优点:定性测定不具有破坏性,定量测定不需标样,灵敏度、精确度、准确度及分析速度高。

  各化学环境不同的质子吸收蜂的面积,只与所包含的质子数有关,可直接根据各共振峰积分值的比值推算所代表的各自旋核的数量。

  1.被测物质的结构必须是已知;2.核磁共振谱线.理想的被测信号是多个质子的单蜂;4.信号两端的基线次积分,取平均值。

  外标绝对测定法样品和外标分别放置在两只核磁管中测定,二管直径必须相同,最好使用同一支样品管。

  被测样品是由若干已知化合物组成,如果没有合适的内标化合物时,可采用以其中一个组分做“标样”。4.

  峰高与自旋-自旋弛豫常数有关,而后者与化合物的类型有关,受局部磁场的影响,故不能直接用于定量。被积信号过于接近而无法准确测定各质子峰积分面积时,可考虑用峰高法进行定量分析,通过实验求出峰高与含量之间的关系,校正误差。(四)质谱法

  进样系统、离子源、质量分析器、检测器、计算机系统药用植物中的组分提取分析:

  蛋白质测定:基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 、电喷雾质谱(ESI-MS)。

  1、多肽与蛋白质的ESI-MS分析采用正离子方式进行,ESI-MS可以产生多电荷离子峰使检测的分子质量范围扩大。2、ESI-MS得到的是一簇多电荷的质谱峰群,相邻两簇质谱峰之间电荷数差1。

  P:多电荷离子质荷比,Mr:蛋白质分子量,Ma:正离子分子量(来源为氢时,Ma=1.0079),Z:多电荷离子带电量

  蛋白质的氨基酸序列经酶解为肽段序列,所测得的肽混合物质量数即称为肽质量指纹谱。

  色谱法是一种重要的分离分析方法,它是根据组分与固定相和流动相的作用力不同而达到分离目的。

  基线——实验条件下,样品加入色谱柱后仅有纯流动相进入检测器时的流出曲线,反映了S/N(信噪比)大小的稳定性的水平直线。

  ——不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时的时间,与色谱柱的空隙体积成正比。

  试样从进样到出现峰极大值时的时间。包括组份随流动相通过柱子的时间t0和组份在固定相中滞留的时间。

  3、调整保留时间(t’R)——某组份的保留时间扣除死时间后的时间,它是组份在固定相中的滞留时间。即t’

  =tR-t04、死体积(V0)——色谱柱管内固定相颗粒间空隙、色谱仪管路和连接头间空隙和检测器间隙的总和。V0=t0

  co,Fco:柱出口的载气流速(ml/min)5、保留体积(VR)——从进样到待测物在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相的体积。6、调整保留体积(V’R

  VR-V07、相对保留值(r2,1)——组份2的调整保留值与组份1的调整保留值之比。r2,1只与柱温和固定相性质有关,而与柱内径、柱长、填充情况及流动相流速无关,又称选择因子或者分离因子α:反映两组分间的分离情况,α=1,则两组分无法分离,而α越大则分离越好。两组分在两相间的分配系数不同,是色谱分离的先决条件。

  色谱峰两侧拐点上切线与基线的交点间的距离。色谱流出曲线的意义:色谱峰数——样品中单组份的最少个数;色谱保留值——定性依据;

  色谱峰高或面积——定量依据;色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标;色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。

  1)塔板之间不连续;2)塔板之间无分子扩散;3)组分在各塔板内两相间的分配瞬间达到平衡(达一次平衡所需柱长为理论塔板高度H);

  4)某组分在所有塔板上的分配系数相同;5)流动相以不连续方式加入(以一个一个的塔板体积加入)。当塔板数n较少时,组分流出曲线呈峰形,但不对称;当塔板数n50时,峰形接近正态分布。

  单个组分粒子在色谱柱内的运动是高度不规则的、随机的,在柱中随流动相前进的速度是不均一的。塔板理论研究的是

  、每个组份峰宽足够小:由组份在色谱柱中的传质和扩散(H或n)决定,即由色谱过程动力学性质决定。

  气相色谱法气相色谱仪:载气系统、进样系统、色谱柱系统、检测系统、记录系统固定液的选择——相似性原则;组分极性差别较大选用极性固定液,沸点差别较大选用非极性固定液。常用检测器

  2、(B=2γDg)减小B:载气线速度较低时用氮气,较高时宜用氦气或氢气;较低的柱温。

  (1)填充柱γ1,空心毛细管柱γ=1。(2)Dg与载气的分子量的平方根成反比,随柱温升高而增大,随柱压增大而减小。3、减小C:固定相的液膜厚度要薄;组分在液相中的扩散系数要大。分离度R

  评价:理论板高(H)、理论塔板数(n)对策:将Van Deemter 各因素优化

  1、气化室温度等于或稍高于试样的沸点,不超过沸点50℃以上,高于柱温30℃~50℃。

  GC用气体做流动相(载气),常用载气(氮气、氦气和氢气)种类少,可选择范围小,对分离影响小;LC中,流动相种类多,对分离结果贡献大。

  GC一般选定一种载气,然后通过改变色谱柱(固定相)以及操作参数(柱温和载气流速)来优化分离;LC则往往是选定色谱柱后,通过改变流动相的种类、组成以及操作参数(柱温)来优化分离。

  GC分离的样品可挥发且热稳定,沸点一般不超过450度。已知化合物中,有20~25%可用GC直接分析,其余原则上可用LC分析。

  、制备分离GC收集馏分后载气很容易除去,原理上有优势,但由于其柱容量远不及LC,故实用价值很有限,而制备LC则有很广泛的应用。

  在经典液相色谱法的基础上,引入了气相色谱法的理论和实验技术,以高压输送流动相,采用高效固定相及高灵敏度检测器,发展而成的现代液相色谱分析方法。具有分离效率高、选择性好、分析速度快、检测灵敏度高、操作自动化和应用范围广的特点。(I

  .经典LC:仅做为一种分离手段;柱内径1~3cm,固定相粒径100μm且不均匀;常压输送流动相;柱效低;分析周期长;无法在线、HPLC

  1、GC:分析可气化、热稳定性好且沸点较低的样品;采用惰性气体为流动相,组分与流动相无亲合作用力,只与固定相作用;实验过程常需加温。

  按分离机制分为分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法、空间排阻色谱法;最常见的是化学键合相色谱法、离子抑制色谱法、离子对色谱法等

  化学键合相色谱法:以化学键合相为固定相的色谱法,适用于分离几乎所有类型的化合物,是应用最广的色谱法。其均一性和稳定性好;柱效高,重现性好;分离选择性高。化学键合相:采用化学反应的方法,将官能团键合在载体表面所形成的固定相。具有使用过程中不流失、化学稳定性好、适于梯度洗脱、载样量大等特点。但流动相的pH应在其相应使用范围内,如2~8,否则硅胶会被溶解;按极性可分为非极性、弱极性和极性三类。非极性键合相:表面基团为非极性烃基,如十八烷基(C18)、辛烷基(C8

  正相色谱法和反相色谱法,最常用的是反相色谱法。正相键合相色谱法以极性键合相为固定相,如氰基(-CN)、氨基(-NH2)等,并以非极性或弱极性溶剂为流动相,如各种烷烃等,即固定相极性大于流动相极性。主要用于分离溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物。

  反相键合相色谱法以非极性键合相为固定相,如十八烷基硅烷(C18)、辛烷基(C8)等,有时也用弱极性或中等极性的键合相为固定相,流动相则以水为基础溶剂,再加入一些与水混溶的有机溶剂,如甲醇、乙腈等,以调整流动相的极性比例,即固定相极性小于流动相极性的色谱法。适合于分离非极性或弱极性化合物,可用于分子型化合物及离子型或可离子化的化合物(加入抑制剂)的分离。

  极性键合相的分离选择性决定于键合相的种类、流动相的强度和样品的性质。1、正相键合相色谱

  一般情况下分离含双键的化合物常用氰基键合相,而分离多官能团化合物则用氨基键合相;流动相常以饱和烷烃加极性调节剂的方式组成。2、反相键合相色谱中,组分极性越弱,疏水性越强,与固定相的亲和力越大,越后洗脱出柱;流动相极性越小,洗脱能力越强,保留时间越短(水增多,保留时间增加)。以长链烷基组成的键合相适合分离非极性化合物,短链烷基键合相则能用于分离部分极性化合物,苯基键合相适用于分离芳香化合物以及多羟基化合物等。

  固定相:颗粒细且均匀;传质快;机械强度高,能耐高压;化学稳定性好,不与流动相发生化学反应。HPLC流动相:

  在正相和反相色谱中,流动相极性强弱与洗脱能力是相反的——相似相溶HPLC

  传质过程——组分在固定相和流动相间不断的溶解、扩散、转移的过程。影响此过程进行的阻力称为传质阻抗

  HPLC仪器主要由输液系统(高压输液泵以及在线脱气和梯度洗脱装置)、进样系统(手动进样阀或自动进样器)、色谱柱系统(色谱柱以及柱温箱)、检测系统和数据记录处理系统组成,制备型HPLC还备有自动馏分收集装置。HPLC的三大关键部件:输液泵、色谱柱、检测器。等度洗脱——

  梯度洗脱——在一个分析周期内可以程序改变流动相组成的洗脱方式。该法适合分析组分数目多,性质相差较大的复杂样品的分离分析。梯度洗脱可以缩短分析时间、提高分离度、改善峰形、提高检测灵敏度,但是可能引起基线漂移和重现性降低。根据具体情况,可将等度洗脱和梯度洗脱结合起来。

  线性梯度洗脱是常用梯度洗脱方式,即在一个分析周期内,流动相随时间均匀线性变化。梯度洗脱有两种装置:高压梯度和低压3、朗伯

  E分为摩尔吸光系数ε和质量吸光系数,两者关系为:,其中M为分子量。(1)条件:1.单色光;2.稀溶液;3.吸收溶质形式不变。(2)当T=0.368,即A=0.434时测量误差最小。透光率20%~65%,A为0.2~0.7时,浓度相对误差在约3倍ΔT以内。4

  (2)信号强度(峰高):υ=-γHT2Mγ:旋磁比,H:外磁场强度,M:质子数,T2

  答:根据塔板理论n=L/H,通过减少理论塔板高度和增大有效柱长可以提高色谱柱理论塔板数。(1)根据速率理论,减小固定相粒度,增大其均匀性,减小流动相粘度,以及控制合适的柱温、选择合适的流动相线速度,有助于理论塔板高度的减少;(2)加长色谱柱工作部分可以增加有效柱长。一般来说,由于色谱柱的强度限制、色谱仪本身的限制,常通过减少理论塔板高度来提高理论塔板数。

  4、空心柱是否能够用于色谱分离?答:可以。只要在柱内有合适的固定相与流动相中的被分离物结合,并能保证k值合适,就能选用空心柱进行色谱分离。例如,空心毛细管气相色谱在毛细管内壁涂覆固定液,既能保证合适的k,又能增大有效柱长、减弱涡流等影响,提高柱效。

  、如何获得色谱最佳流速?答:根据速率理论可知,H=A+B/u+Cu,故存在一个最佳流速。实际操作中,要根据所用色谱、固定相颗粒大小、流动相的性质、柱温等选择合适的流速。对于HPLC,降低流速有利于减小H,提高柱效,但是流速过低,分离时间又太长,应根据具体情况合理选择。

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